A和p-MLC2。为了评估抗血管生成治疗（贝伐珠单抗治疗）和RAS抑制对血管系统的综合影响，我们测量了一大群CRCLM中的血管密度。与Bev-组相比，Bev+组的血管密度显着降低了%±%。然而，与非RAS、Bev+治疗相比以及与所有Bev-组。这与使用的RAS治疗类型无关。因此，抗RAS药物靶向组织硬度，从而影响贝伐单抗的疗效。

　　8、通过RAS和血管生成抑制减少EC增殖

　　?EC增殖随硬度增加而增加，VEGF进一步诱导增殖，低硬度时VEGF效应最高（图A-C）。此外，我们分析了在不同密度的纤维蛋白原基质（刚度的代表）中存在或不存在VEGF的情况下EC发芽。EC发芽（芽的数量和长度）随密度增加。VEGF导致在所有条件下进一步发芽，VEGF在软基质中的作用更显着，如EC增殖的情况。

　　?为了了解抗RAS药物和贝伐单抗的组合如何影响转移灶内的EC，我们量化了它们对EC增殖的影响。单独的贝伐单抗治疗导致EC增殖减少%±%。由于转移僵硬与独立于治疗的转移内的EC增殖相关，我们评估了RAS抑制是否足以减少EC增殖。在未接受抗血管生成治疗的患者中，RAS抑制并未显着降低EC增殖；然而，在接受贝伐单抗和抗RAS药物治疗的患者中，EC增殖进一步降低了%±%）。

　　9、RAS和血管生成抑制改善血管完整性

　　?有趣的是，VEGF和基质硬化都有效地导致血管通透性。为了进一步表征抗RAS药物对血管完整性的作用，我们通过对紧密连接蛋白ZO-1（封闭小带1）进行免疫染色分析了它们对EC连接稳定性的影响。虽然建议贝伐单抗治疗导致消除未成熟血管，但我们观察到贝伐单抗对ZO-1紧密连接没有变化（图A-B）。与之前在其他疾病模型中的发现一致，即增加基质刚度可增强内皮通透性，我们还观察到ZO-1覆盖率与CRCLM的组织硬度之间存在负相关，表明在更硬的LM(图C)。在接受抗RAS药物治疗的Bev-患者中，我们还观察到EC中ZO-1覆盖率的增加，表明单独的抗RAS足以改善内皮连接稳定性（图A，D）。然而，在联合治疗（Bev+和抗RAS）中，对连接稳定性的影响大大增强（图A，E）。

　　?KLF2是一种剪切应力响应转录因子，其表达随层流剪切应力增加，是灌注的标志。抗血管生成治疗没有改变内皮细胞中KLF2的表达（图F-G）。然而，KLF2表达与组织刚度呈负相关，表明基质硬度增加会损害灌注（图H）。在未接受贝伐珠单抗治疗的患者

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